Paso 5: Estequiometría
Mientras esperábamos para que nuestros pedidos llegar de IDT y de Tilibit, teníamos que hacer algunos estequiometría para determinar las cantidades exactas de productos químicos y de ADN para utilizar en nuestros experimentos.
Dado el reactivo:
De Tilibit:
- Andamio de 500 μl 100 nM
- Búfer plegable de 500 μl de 10 X
- 500 μl 200 mM MgCl2
De IDT
- 111 x 25 nmol grapas en placas de 2 x 96 pozos
Asumir una reacción final de
- 1 Tampón X
- 12 mM MgCl
- andamio de nM 20
- 200 nM cada grapa
Asumir que 1 uL de cada grapa resuspendida se añadirá a una solución con un volumen final de 200 uL.
Calcular que el volumen de MgCl2 necesaria para producir una concentración de 12 mM en una solución de 200 uL dada 500uL de una solución de 200 mM.
Calcular el volumen de andamio necesario para producir una concentración de nM 20 en una 200 uL solución dado 500 uL de una 100 uM solución.
Calcular el volumen de amortiguamiento necesario para producir una concentración de 1 x en una solución de 200 uL dada 500 uL de 10 X tampón.
Recuerde que eso almacenador intermediario de X 1 se compone de
- 5 mM Tris
- 1 mM EDTA
- 5 mM NaCl
y así el buffer X 10 se compone de
- 50 mM Tris
- 1 mM EDTA
- 5 mM NaCl
Esto nos ayuda a calcular el volumen. Así que tomar cualquiera de los componentes del tampón y calcular que el volumen de Tris necesaria para producir una concentración de 5 mM en una solución de 200 uL dada 500uL de una solución de 50 mM.
O podríamos simplemente sabemos que 10 X a 1 X es una dilución de 1/10!
Calcular los componentes de la reacción final dados un volumen final de 200 uL:
Calcular el volumen de resuspensión discontinuas y concentración dado el volumen de distribución 1 uL y masa 25 nmol de cada grapa.
