Paso 3: Amplificación de PCR
Con adecuados primers pueden amplificar la secuencia de elección. Si te has dirigido a conseguir algunos de Arabidopsis thaliana y el siguiente debería funcionar para amplificar ACT2 (At3g18780 http://www.arabidopsis.org/servlets/TairObject?accession=locus:2093954 ) que será un agradable control positivo, fueron diseñados por mi amigo John Hamilton de la Universidad de Durham.
Hacia adelante
5' GGATCGGTGGTTCCATTCTTGC
Marcha atrás
5' AGAGTTTGTCACACACAAGTGCA
Trabajan bien con una temperatura de recocido de C. 56-58 Abarcan un intrón así genómico dará producto de 342bp pero si utilizas para rt-PCR luego cDNA dará 256bp.
La imagen es un gel de agarosa de una PCR, el ADN se añade a los pocillos y un movimientos corriente eléctrica a través del gel, pequeños bits pueden menear más rápido a través de así mover más. En la izquierda es un marcador de peso molecular de digerido fago ADN, las bandas se conocen tamaños así pueden ser utilizados para juzgar el tamaño de nuestros productos PCR. Bromuro de etidio se añadió el gel por lo que el ADN se puede visualizar con rayos UV.
